무균성 테스트 애플리케이션 존재/부재 확인 및 회수 테스트 프로토콜을 위한 MicroFunnel™ ST 필터 퍼널

1.0 보라색

이 테스트는 MicroFunnel ST 필터 퍼널 제품이 무균성 테스트 애플리케이션에 사용하기에 적합하고 이 프로토콜에 정의된 약전 유기체를 회수함을 검증하기 위한 것입니다.

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2.0 범위

USP-24 및 EP-2000에 나열된 MicroFunnel 필터 퍼널에서 존재/부재 확인(이동) 및 미생물 회수 연구를 수행하기 위한 것입니다. 각 유기체마다 MicroFunnel ST 필터 퍼널 로트 3개가 3번 테스트됩니다.

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3.0 참고문헌

3.1 USP24 <71> 무균성 테스트

3.2 USP24 <1227> 약전 조항에 따른 미생물 회수 검증

3.3 EP 2000 2.6.1. 무균성

3.4 용수 및 폐수 검사를 위한 표준 방법, 19판(1995년)


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4.0 시료 요건

각각의 세 개 개별 로트의 150 MicroFunnel ST 필터 퍼널. 각 테스트 유기체마다 각각의 MicroFunnel ST 필터 퍼널 로트가 3번 테스트됩니다.

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5.0 소재

5.1 테스트 유기물

대장균(Escherichia coli), ATCC 8739

녹농균(Pseudomonas aeruginosa), ATCC 9027

황색 포도상구균(Staphylococcus aureus), ATCC 6538P

고초균(Bacillus subtilus), ATCC 6633

클로스트리듐 속균(Clostridium sporogenes), ATCC 19404(또는 클로스트리듐 속균, ATCC 11437)

칸디다균(Candida albicans), ATCC 10231

흑색국균(Aspergillus niger), ATCC 16404

5.2 장비

진공 매니폴드

와류 믹서

배양기, 32.5 ± 2.5°C 및 22.5 ± 2.5°C

수조(45 ± 1°C)

Quebec 집락 계측기

페트리 플레이트, 15 X 100mm 및 15 X 150mm

피펫, 1mL 및 10mL, 멸균

피페터, 1000람다

냉수조

혐기성 생물 단지 또는 파우치

입체 현미경

5.3 미디어 및 시약

SCD(대두 카제인 소화) 세균 배양액

혐기성 세균 배양액

대두 카제인 소화 배지, 200mL 병, 멸균

FTM(액체 티오글리콜린산염 배지),

200mL 병, 멸균

염분(0.9% NaCl), 멸균

멸균 0.1% 펩톤수

멸균 염분 TS

(0.05% 폴리소베이트80 함유)

멸균 0.1% 펩톤수(0.05% - 0.1% Tween 80 함유)


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6.0 절차

6.1 유기물 준비

6.1.1 표준 연구실 관행에 따라 약전 유기물을 증식합니다.

6.1.2 각 유기물 현탁액을 희석하여 mL당 100집락 미만의 농도를 만듭니다. 비아포성, 호기성 유기물에는 멸균 식염수를, 아포성 박테리아 및 균류 포자 현탁액에는 멸균 식염수 TS(0.05% 폴리소베이트 80 함유)를 사용합니다.

6.2 퍼널 분석

6.2.1 테스트하려는 로트 1개에서 MicroFunnel™ ST 필터 퍼널 3개를 열어 매니폴드 바로 위에 놓습니다. #8 마개가 있는 파란색 어댑터를 대신 사용해도 좋습니다.

6.2.2 100mL의 멸균 헹굼액을 각 MicroFunnel ST 필터 퍼널에 따릅니다. 비아포성, 호기성 유기물에는 멸균 0.1% 펩톤수를, 아포성 박테리아 및 균류 포자 현탁액에는 멸균 0.1% 펩톤수(0.1% Tween 80 함유)를 사용합니다. 필터 퍼널 뚜껑을 다시 닫고 진공을 작동하여 유체를 내려보낸 다음 진공을 끕니다.

6.2.3 단계 6.2.2.를 반복합니다.

6.2.4 100mL의 멸균 헹굼액을 각 MicroFunnel ST 필터 퍼널에 따릅니다. 비아포성, 호기성 유기물에는 멸균 0.1% 펩톤수를, 아포성 박테리아 및 균류 포자 현탁액에는 멸균 0.1% 펩톤수(0.1% Tween 80 함유)를 사용합니다.

6.2.5 0.1mL 피펫이나 유사 도구를 사용하여 테스트 유기물 현탁액 1.0mL를 각 필터 장치에 넣습니다.

6.2.6 필터 퍼널 뚜껑을 다시 닫고 진공을 작동하여 유체를 내려보낸 다음 진공을 끕니다.

6.2.7 뚜껑을 열고 퍼널 실린더를 살짝 압착하여 베이스에서 빼낸 다음 알코올로 화염 소독한 집게로 멤브레인 가장자리를 들어 올려 첫 MicroFunnel ST 테스트 퍼널에서 멤브레인을 꺼냅니다. 이때 실제 여과 구역에 닿지 않게 주의하십시오.

6.2.8 미리 준비한 세균 배양액 플레이트 표면에 멤브레인의 오른쪽이 위를 보게 하여 올려 놓습니다. 멤브레인 아래 기포가 끼지 않도록 굴리는 동작을 사용합니다. 호기성 유기물에는 SCD 세균 배양액 플레이트를, 클로스트리듐(Clostridium) 속에는 혐기성 세균 배양액 플레이트를 사용합니다.

6.2.9 단계 6.2.7에서 설명한 방식으로 두 번째 MicroFunnel ST 테스트 퍼널에서 멤브레인을 빼내고 무균 기법을 사용하여 멤브레인을 FTM 200mL 병에 담급니다.

6.2.10 단계 6.2.7에서 설명한 방식으로 세 번째 MicroFunnel ST 테스트 퍼널에서 멤브레인을 빼내고 무균 기법을 사용하여 멤브레인을 SCD 200mL 병에 담급니다. 클로스트리듐(Clostridium) 속의 경우 SCD 배지에 담글 필요가 없습니다.

6.3 MicroFunnel ST 필터 퍼널 로트 내에서 테스트를 복제합니다.

6.3.1 MicroFunnel ST 필터 퍼널 각 로트에 대해 3회의 복제 테스트를 수행하되 회수 및 존재/부재 방식을 둘 다 사용합니다.

6.3.2 회수 및 존재/부재 방식을 둘 다 사용하여 MicroFunnel ST 필터 퍼널 로트 세 개에 대한 성능을 평가합니다.

6.3.3 MicroFunnel ST 필터 퍼널 세 개 로트 각각에 대한 복제를 모두 검사할 때까지 6.2에 제시된 단계를 반복합니다.

6.3.4 MicroFunnel ST 필터 퍼널 세 개 로트 각각에 대한 복제물 3개에서 모든 유기물을 평가할 때까지 6.2에 제시된 단계를 반복합니다.

6.4 통제

6.4.1 접종원 수: 별도의 멸균 페트리 플레이트에 6.1.2 단계에서 준비된 각 유기물 현탁액을 1.0mL씩 놓아 5개 - 10개의 밀도 통제 플레이트를 준비합니다. 약 45°C - 48°C로 식힌 녹은 세균 배양액 약 20mL를 추가하고 양 방향으로 여러 번 살살 저어 섞어 세균 배양액을 굳힙니다. 클로스트리듐(Clostridium) 속의 경우 혐기성 세균 배양액을, 기타 모든 유기물의 경우 SCD 세균 배양액을 사용합니다.

6.4.2 성장 촉진 통제: 해당되는 유기물에 사용된 모든 미디어(배지 및 세균 배양액)의 한쪽, 또는 테스트에 사용된 그대로 양쪽 모두에 직접 균을 접종합니다. 섹션 6.5의 설명대로 배양합니다.

6.4.3 미디어 멸균 관리: 평가에 사용된 모든 세균 배양액과 배지의 무접종 복제물을 최소 2개 이상 배양합니다.

6.4.4 헹굼액/멤브레인 음성 통제: 각 헹굼액 로트 300mL를 4회 복제 MicroFunnel 필터 퍼널을 통과시켜 여과합니다. 필터 1개는 혐기성 세균 배양액 위에 놓고, 1개는 SCD 세균 배양액 위에 놓고, 1개는 SCD 배지에 담그고, 나머지 필터 1개는 FTM에 담급니다. 섹션 6.5대로 배양합니다. 사용된 각 필터 또는 MicroFunnel의 각 로트별로 이러한 통제를 반복합니다.

6.4.5 헹굼액/멤브레인 양성 통제: 헹굼액으로 사용된 펩톤수 각 로트 300mL를 복제 MicroFunnel ST 필터 퍼널을 통과시켜 여과하고 1개는 SCD 배지에 담그고 다른 1개는 FTM에 담근 다음 테스트 유기물 현탁액으로 접종합니다. 사용된 각 유기물에 대해 이 과정을 반복합니다.

6.5 배양

6.5.1 혐기성 세균 배양액 플레이트를 혐기성 조건에서 32.5 ± 2.5°C로 최대 7일간 배양합니다. 정기적으로 성장 상태를 점검하고 집락이 분명히 보이면 계측합니다. 멤브레인 상의 집락을 잘 볼 수 있도록 입체 현미경을 사용하거나 주입 평판법의 경우 Quebec 계측기를 사용할 수 있습니다.

6.5.2 Incubate B. subtilus, C. albicans, and A. niger organisms cultured on SCD agar plates at 22.5 ± 2.5 °C for a maximum of 7 days. 정기적으로 성장 상태를 점검하고 집락이 분명히 보이면 계측합니다. 멤브레인상의 집락을 잘 볼 수 있도록 입체 현미경을 사용하거나 주입 평판법의 경우 Quebec 계측기를 사용할 수 있습니다.

6.5.3 Incubate E. coli, P. aeruginosa, and S. aureus organisms cultured on SCD agar plates at 32.5 ± 2.5 °C for a maximum of 7 days. 정기적으로 성장 상태를 점검하고 집락이 분명히 보이면 계측합니다. 멤브레인상의 집락을 잘 볼 수 있도록 입체 현미경을 사용하거나 주입 평판법의 경우 Quebec 계측기를 사용할 수 있습니다.

6.5.4 SCD 배지

6.5.4.1 Incubate SCD broth inoculated with E. coli, P. aeruginosa, and S.aureus organisms at 32.5 ± 2.5 °C for a maximum of 3 days. 정기적으로 혼탁도를 점검합니다.

6.5.4.2 Incubate SCD broth inoculated with B. subtilus, C. albicans, and A. niger at 22.5 ± 2.5 °C for a maximum of 5 days. 정기적으로 혼탁도를 점검합니다.

6.5.5 FTM

6.5.5.1 Incubate FTM inoculated with E. coli, P. aeruginosa, C. sporogenes, and S. aureus at 32.5 ± 2.5 °C for a maximum of 3 days. 정기적으로 혼탁도를 점검합니다.

6.5.5.2 Incubate FTM broth inoculated with B. subtilus, C. albicans, and A. niger at 22.5 ± 2.5 °C for a maximum of 7 days. 정기적으로 혼탁도를 점검합니다.


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7.0 결과

7.1 멤브레인 필터에서 얻은 집락의 수와 형태상 특징을 기록합니다.

7.2 주입 평판법의 경우 Quebec 계측기를 사용하여 집락을 계측합니다. 계측 및 기록을 위해서는 용수 및 폐수 검사용 표준 방법, 최신판, 9215 A.8항을 참조하십시오.

7.3 FTM과 SCD 배지의 혼탁도를 점검하여 결과를 기록합니다. 테스트 시료의 성장 상태가 통제 시료와 같은지 기록합니다.

7.4 계산

7.4.1 각 유기물과 MicroFunnel™ ST 테스트 시료 로트 및 통제 멤브레인에 대한 평균 수를 계산합니다.

7.4.2 계산된 각 평균값에 대한 표준 편차, σ, cV를 계산합니다.
cV = ( σ ÷ x ) ( 100 )

7.4.3 SCD 주입 평판법 밀도 통제에 대한 평균 및 표준 편차를 계산합니다(접종원 수).

7.4.4 MicroFunnel 시료와 통제 멤브레인의 회수율(%)을 계산합니다.

% 회수율 =   멤브레인 평균    x 100

접종원 수 평균

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8.0 제한 및 결론

8.1 각 MicroFunnel ST 테스트 퍼널 각 로트의 회수율은 통제 밀도의 70% 이상이 되어야 무균성 테스트 퍼널로 사용하기에 적합한 것으로 간주할 수 있습니다.

8.2 시료 그룹의 cV가 20% 미만인 경우 해당 미디어에 대한 해당 그룹의 테스트는 무효로 간주되며 반복 시행해야 합니다.

8.3 미디어 통제 그룹의 cV가 20% 이상이면 해당 미디어에 대한 전체 테스트(모든 테스트 퍼널 및 통제)가 무효로 간주될 수 있습니다.

8.4 밀도 플레이트 그룹에 대한 cV가 20% 이상이면 해당 특정 유기물 현탁액을 사용한 전체 테스트가 무효로 간주될 수 있습니다.

8.5 존재/부재 테스트의 경우 테스트 배지의 성장률이 통제 배지에서 얻은 성장률과 같아야 합니다. 모든 테스트 시료가 모든 미생물에 대해 엄청난 성장을 보이는 경우 이 방법은 유효한 것으로 간주될 수 있습니다.

8.6 MicroFunnel ST 테스트 시료의 각 로트에 대해 접종된 모든 SCD 배지와 FTM 블랭크의 혼탁도를 관찰해야만 무균성 테스트 퍼널로 사용하기에 적합한 것으로 간주될 수 있습니다.

8.7 테스트 현탁액을 SCD 배지나 FTM에 직접 접종하지 않아 혼탁도가 큰 결과가 나올 경우 테스트는 무효가 되고 반복 시행해야 합니다.

8.8 기타 모든 음성 및 양성 통제는 예상된 반응을 나타내야 합니다. 차이가 있을 경우 보고하십시오.


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주문 정보

MicroFunnel™ ST 필터 퍼널
제품 번호 설명 공극 크기
4750 Supor¨ 450 멤브레인을 사용하는 MicroFunnel ST, 무지, 멸균, 100mL 용량 0.45µm
4751 Supor¨ 450 멤브레인을 사용하는 MicroFunnel 300 ST, 무지, 멸균, 300mL 용량 0.45µm
4811 GN-6 Metricel¨ 멤브레인을 사용하는 MicroFunnel ST, 격자형, 멸균, 100mL 용량 0.45µm
4812 GN-6 Metricel¨ 멤브레인을 사용하는 MicroFunnel 300 ST, 무지, 멸균, 300mL 용량 0.45µm
포장 노트:

100mL 퍼널(상자당 총 40개): 오버팩 봉지 1개 안에 개별 포장된 퍼널 10개, 상자당 오버팩 봉지 4개

300mL 퍼널(상자당 총 20개): 오버팩 봉지 1개 안에 개별 포장된 퍼널 5개, 상자당 오버팩 봉지 4개


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보조 제품

Filter Funnel 매니폴드
제품 번호 설명 포장
15402 3포트 알루미늄 1/pkg
15403 6포트 알루미늄 1/pkg
82728 #8 고무 마개 1/pkg
기타
제품 번호 설명 포장
13158 진공/압력 펌프, 230V 1/pkg
13159 수리 키트 및 예비 부품 1/pkg
13160 진공 펌프, 115V 1/pkg
13161 진공 펌프, 230V 1/pkg
4402 Vacushield™ 진공 펌프 보호 필터 3/pkg
51147 스테인리스스틸 집게 1/pkg

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